荧光PCR冻干及蛋白质类冻干保护剂

常用的冻干保护剂种类有多轻基化合物、糖、蛋白质、聚合物、氨基酸、盐、胺、表面活性剂等。蛋白质类冻干保护剂可分为两种 : 一种是蛋白质药物自身，另一种为外来蛋白质。 一些蛋白质经冻融后的活性直接和蛋白质的起始浓度有关 , 起始浓度升高有时会促进蛋白质的复性一种常用的外来蛋白质类保护剂为血清白蛋白 , 它是一个经典 、优良的蛋白质稳定剂 。 例如 , 冷冻时 , 1 % 牛血清白蛋白可使溶液的活性不受损失 ;人血清白蛋白则在更低浓度 ( 0 . 0 5 % 一 0. 1 % ) 时也能有效阻止蛋白质表面的吸附，对冻干过程中多数蛋白都具有保护作用。当干燥蛋白质药物时保护剂紧密地包裹相邻近的蛋白质分子形成一种在结构上与冰相似 的碳水化合物玻璃体,由于私度很高其扩散系数很低蛋白质分子运动能力减某一蛋白质的保护作用通常有一个好的使用浓度( 或使用量 ) , 故选择保护剂时还要合理选择使用量。在做溶液冻干时，溶液浓度高或低对制干燥过程中药液表面首先品的影响。溶液浓度过高时：被干燥形成结构致密的表层。该表层孔隙细小，透气性差，里面的水分难以穿过表层，因而沿瓶壁上升，导致制品离壁、萎缩；此外，浓度过高时，药液在干燥过程冻干中容易结块，所得制品外观不均匀。浓度过低时：机械强度低，在包装及运输过程后制品结构比较疏松甚至变成粉末，影响制品的外观。分享荧光PCR试剂冻干示例：(1)将荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、冻干保护剂按照配方进行混合；（2）冻干保护剂，可选用：甘油、海藻糖、蔗糖、甘露醇、PEG、PVP、DTT、牛血清白蛋白、吐温100、甲酰胺、氨基酸等。（3）将上述混合液灌装至PCR扩增管或者八联管中。（4）进行冻干。（5）出仓进行测试。（6）配方修正。