荧光定量PCR实验时的好方法

实时荧光定量PCR技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，成为核酸分子定量的标准方法。在做荧光定量PCR实验时建议使用这些耗材：96孔光学反应板配合光学膜，0.2ml光学八联反应管配合光学膜，0.2ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖等。在做荧光定量PCR实验时有一些好的方法分享给大家，例如在使用单管或者8连管做实验时，如果在样本数量不多的时候，建议在样品加热块（TRAY）上对称的安放样品，并且先放在第6列或者第7列，然后逐渐向两边放置。这样热盖压下来的时候不至于发生倾斜，每个反应管的受力和受热都比较均匀，提高了孔与孔之间的数据精密性。又例如使用96孔板做实验的时候，建议使用光学膜代替盖子来密封反应孔。封膜的方法要先沿着96孔板的纵向压膜，然后在横向，后在沿着板的边缘按压密封。Pilot5-8T冻干机应用示例（荧光PCR冻干）：

1. 探针、底物、引物原料要求确定。
2. 冻干溶液配方开发，采用正交法或响应曲面法进行辅料筛选。
3. 选择适合的包材和模具。
4. 设计冻干曲线配合辅料筛选。
5. 确定配方及工艺。
6. 稳定性测试。
7. 根据稳定性测试结果修正工艺或配方。
8. 整个环节注意环境、设备、人员的结合。